Elaboración de un Antibiograma
OBJETIVOS
- Determinar la sensibilidad a diversos antibióticos de
un determinado microorganismo
- Comprender el concepto de antibiótico y su
especificidad de acción sobre determinadas bacterias.
- Conocer el concepto de cepa sensible y
resistente.
- Entender el concepto de halo de inhibición.
- Ser consciente de la importancia de la higiene y el
cuidado en la manipulación de materiales biológicos.
- Comprender la importancia de la eliminación de los
residuos orgánicos
- Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiología y los procedimientos para su utilización
MATERIALES
- Jeringa con suero fisiológico estéril (solución de Nacl
al 0,9%)
- Placa “problema” (cultivada en agar-sangre)
- Discos de diferentes tipos de antibióticos (4-6 tipos
distintos)
- Tubos de ensayo
- Placa agar-sangre
- Regla milimetrada
- Rotulador de vidrio
- Cinta adhesiva
- Pinzas finas
- Contenedor con lejía
- Torunda estéril
- Tablas para determinación de
resistencias
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
- No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la
muestra biológica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para
evitar contaminaciones.
- Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en
un contenedor especial. Estos contenedores serán llevados posteriormente a una
planta de tratamiento de residuos biológicos, donde serán incinerados.
- Todos los materiales o muestras tomadas deben estar
perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de
muestra.
- Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva
al finalizar para evitar su contaminación o la nuestra.
- Al acabar la práctica, se deben lavar bien las
manos.
- Tomamos con una jeringa una pequeña cantidad de suero
fisiológico estéril (2-5 ml) y lo vertemos en un tubo de ensayo.
- A
partir de la placa problema, que contiene colonias del microorganismo cuya
sensibilidad a los antibióticos queremos determinar, tomamos una muestra
SUPERFICIAL de
UNA SOLA COLONIA con
un asa de siembra.
- Introducimos
el asa de siembra con la muestra en el tubo y agitamos el asa
para realizar
una suspensión de las bacterias en el suero fisiológico. Al acabar echamos al
contenedor de residuos el asa de siembra.
- Introducimos un
hisopo estéril en el tubo,
mojar el hisopo estéril en la
suspensión. Escurrir el exceso de líquido contra las paredes del tubo de
ensayo. Tapar el tubo e inocular la placa pasando muy suavemente por la
superficie de la placa agar-sangre nueva. En esta ocasión realizaremos una
siembra en césped, es decir, por toda la superficie de la placa,
para conseguir que crezca bacterias de modo masivo (no interesa aislar
bacterias como en la práctica del frotis faríngeo). Es importante que la
siembra sea SUPERFICIAL, sin profundizar en el medio de cultivo. (se
puede Inocular dos veces más en ángulos de 60°)
- Se tapa la
placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha y marcando con
una A la tapa (Antibiograma)
Colocación de los discos de antibiótico
Tomando ahora con las pinzas - NUNCA CON LAS MANOS- un disco de cada uno de los antibióticos que se facilitan (cada disco es un papel de filtro que contiene una suspensión de uno varios antibióticos a la
concentracion terapéutica).
Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar la superficie con las pinzas. es muy importante que el disco contacte con el medio de cultivo en un unico sitio.
Realizamos la misma operación con los otros cinco antibióticos, colocando los nuevos discos separados de los anteriores, formando un hexágono.
Incubación y observación
Se llevan las placas a incubar a 37°C (temperatura corporal) durante 24 horas. tras este periodo se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano.
Medición del halo de inhibición
Porla parte trasera de la placa incubada mediremos el diámetro de los halos de
inhibición que se han formado alrededor de los discos de antibiótico a los que la bacteria “problema” es sensible.
Anota
los datos en la representación de la figura 2, indicando con un número del 1 al 6, el antibiótico colocado en el disco y dibujando la presencia o ausencia de halos y su tamaño en mm.
Con ayuda de las tablas que se te proporcionan determina si la bacteria es sensible (S) o resistente (R) a cada antibiótico y anótalo en la tabla, en las columnas correspondientes.