Introducción
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción
diferencial empleado en Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella. Microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las
células bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar
la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza
una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Objetivos
Utilización de técnicas sencillas para la observación de microorganismo
Conocer o manejo del microscopio óptico para la observación de bacterias (importancia del objetivo de inmersión)
Conocer y manejar las unidades de medida de la células establecer comparaciones entre tamaños de procariotas y de eucariotas
Reconocer los distintos modelos de pared bacteriana.
Materiales
Mechero de bunsen o de alcohol
Asa de siembra o aguja
Enmangada
Pinza
Portaobjetos
Muestras bacterianas de origen natural : yogurt, sarro dental, suelo,
etc
Palillos
Microorganismos
Aceite de inmersión
Soporte de tinciones
Goteros
Agua destilada
Colorantes
para la tinción: solución de cristal violeta lugol safranina etanol 95
%
Cultivos: cultivos líquidos y sólidos de escherichia coli.,
streptoccocus sp., staphyloccus sp. Bacilus subtilis y klebsiella
sp.
Procedimiento
·Primero prendimos el mechero y esterilizamos el asa hasta que tomo un color rojo vivo.
· Ya esterilizada el aza procedimos a extraer la muestra del aurios, lo pusimos en el portaobjetos.
Le agregamos una gota de agua luego extendimos suavemente la muestra y lo dejamos secar por unos momentos en el mechero.
·Posteriormente lo llevamos a la tina y le agregamos a la
muestra el cristal violeta.
· y proseguimos a lavarlo con agua, después que lavamos la muestra con agua le agregamos lugol por un minuto, nuevamente lavamos con agua
entonces le agregamos gotas de alcohol acetona hasta que las gotas que
salían quedaran sin color.
· Al quedar sin color le añadimos una gota de agua y le agregamos 2 gotas
de safranina y esperamos dos minutos.
· Ya realizados estos pasos secamos la muestra con calor perro no tan
pegada al mechero para que no se quemara la muestra.
· Entonces colocamos la muestra en el microscopio y buscamos la
bacteria
· El procedimiento realizado lo hicimos también con la bacteria
enterobacter.
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